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识别糖表位单克隆抗体的制备、鉴定和抑瘤作用
资料类别
   生物农医毕业论文(设计)
课程(专业)
  细胞生物学
关键词
  单克隆抗体3P9|糖链抗原sTn
适用年级
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  29494K
发布时间
  2020-01-09 19:11:00
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发布人   kj008

 内容简介:
   识别糖表位单克隆抗体的制备、鉴定和抑瘤作用,博士学位论文,共85页,附答辩文稿。
  摘 要
  抗体的最大特征是其识别抗原的专一性,因此在肿瘤诊断和靶向治疗中发挥重要作用。然而,获得新功能抗体的关键是发现新靶分子,这一直是抗体研究领域的热点和难点。我们利用抗体差异筛选技术,用结肠癌细胞SW1116作为抗原免疫小鼠,通过正常/肿瘤组织差异筛选获得一株单克隆抗体,命名为3P9(IgM/κ)。本文主要介绍抗体3P9的制备、抗原决定簇鉴定及其抑瘤作用,获得主要结果如下:
  (1)免疫组化检测323例肿瘤和正常组织,发现抗体3P9特异识别腺癌组织,如结肠癌,直肠癌,乳腺癌,卵巢癌,子宫内膜癌和食道癌,不识别分泌粘蛋白的正常组织;(2)用糖生物学方法和糖芯片研究3P9抗原,发现3P9抗体识别的抗原决定族是涎酸化二糖结构(sTn);(3)体外细胞生物学实验表明,抗体3P9对sTn阳性结肠腺癌细胞的迁移具有明显的抑制作用,并且诱导靶细胞凋亡;(4)动物实验表明,抗体3P9能够抑制sTn阳性人结肠肿瘤的生长;(5)构建了3P9VH/κ小分子抗体,通过原核表达和复性,分析了小分子抗体的特异性和生物活性。
  以上结果表明,抗体差异筛选肿瘤靶分子的策略是可行的,而且弥补了基因和蛋白质芯片的不足,最突出的优点是:(1)捕获的抗原能够保持其天然构象,避免了重组蛋白由于构像异常而造成的假阳性;(2)不仅能够捕获蛋白质抗原,而且还可以获得非蛋白类抗原,如糖类、脂类抗原。通过这种方法获得识别糖表位的肿瘤特异抗体3P9 有望应用于以下几个方面:(1) 腺癌的诊断和预后监测;(2) 人源化3P9 抗体有望用于结直肠癌的治疗;(3) 由于糖抗原免疫原性较低,研制抗3P9 独特型抗体可作为sTn 的内影像结构疫苗;(4) 作为一种新的研究工
  具应用于肿瘤糖生物学研究。
  在2003年刚进入实验室时,正值为遏制SARS重临寻找对应措施和加紧研制抗SARS药物和疫苗的关键阶段,作者参与了SARS的专项研究工作。主要贡献如下:(1) 从四例SARS恢复期患者的外周血分离淋巴细胞,构建针对SARS病毒的噬箘体人抗体库。库容量为1.83×106。通过免疫亲和筛选,获得两株特异识别SARS病毒的单链抗体,H12和B1。尽管这两株抗体都具有病毒中和作用,但它们识别的表位不同。通过抗原表位鉴定,我们发现单链抗体B1识别SARS病毒S2( 1023-1189 ) , 为线性表位( Biochem Biophys Res Commun. 2005 Jul22;333:186-93); 而单链抗体H12识别S1(12-672)二聚体,为构象依赖型表位(Antivir Ther. 2006;11:117-23)。 (2) 研究了光触媒钛网膜(PTAF)对SARS病毒的灭活作用,发现光触媒钛网膜能有效杀灭SARS活病毒,比普通羟基磷灰石网膜(HAT)的杀病毒作用强1000倍(生物学与生物物理进展, 2004,31: 982-985)。
  关键词: 单克隆抗体3P9,糖链抗原sTn,,肿瘤生长抑制,噬菌体抗体库SARS冠状病毒

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